Kültür ortamının hazırlanması: nelerden oluştuğu, amaçları ve adımları

Kültür ortamının hazırlanması, laboratuvarlarda istenen mikroorganizmaların büyümesi için kullanılan rutin bir metodolojidir. Kültür ortamı, bir mikrobiyal popülasyonun gelişimi için gerekli tüm besin maddelerine sahip katı, sıvı veya yarı katı preparasyonlardır.

Genel olarak, mikroorganizmaları büyütme araçları proteinler ve amino asitler bakımından zengindir ve genellikle çalışmak istediğiniz organizmanın, vitaminler, kan, serum gibi diğerlerinin yanı sıra büyümesini destekleyen bir bileşen içerir.

Genel veya evrensel bir kültür ortamı yoktur, çünkü bileşimi ilgili mikroorganizmanın ihtiyaçlarına göre değişir. Bazı bakteriler herhangi bir kültür ortamında gelişebilir, ancak bazılarının özel gereksinimleri vardır.

Nelerden oluşur?

Mantar ve bakteri gibi mikroorganizmalar küçük boyutlarından dolayı bireysel olarak incelenemezler. Bu nedenle, popülasyonda önemli bir artışa izin veren yapay medyada yetiştirilmelidir.

Örneğin, bakteri araştırmak istiyorsak, onlara doğru koşulları sağlamalıyız, böylece bir koloniyi (çıplak gözle gözlemlenebilir) çoğaltabilir ve oluşturabilirler.

Kültür ortamının hazırlanması, kişinin yetiştirmek istediği mikroorganizma tipine bağlı olarak geniş ölçüde değişir. Hazırlamadan önce, çalışma vücudunun temel beslenme ihtiyaçlarını bilmek gereklidir.

Daha sonra, kültür ortamında kullanılan en yaygın bileşenlerin, bunların hazırlanması hakkında genel bir fikre sahip olduğu açıklanacaktır:

agar

Bitkilerde jelleştirici madde olarak kullanılır ve katı veya yarı katı bir ortam ararken ilave edilir. Ortamın hazırlanmasında kullanılan ilk katılaşma maddesi jelatindi, ancak 1883 yılında ağar, bakteriyoloji dünyasına W. Hesse tarafından tanıtıldı.

Bakteriyolojik agar, ana bileşeni olarak alglerden çıkarılan kompleks dalların bir polisakaritine sahiptir. Bu bileşik, dondurma ve reçeller gibi yaygın yiyecekler için koyulaştırıcı olarak kullanılır.

Mikrobiyolojide birçok nedenden dolayı çok değerli bir unsurdur. Temel olarak mikroorganizmalar onu bozamaz, çünkü 100 ° C'lik bir sıcaklıkta sıvılaştırılır ve 45 ° C'ye veya daha düşük olana kadar sıvı halde kalır.

Katı bir ortam hazırlamak istediğinizde, agar konsantrasyonu% 1.5 civarında olmalı, yarı katılar% 0.3 ila 0.5 arasında hazırlanmalıdır.

sıvılar

Patojenik organizmaların ekimi vücut sıvıları gerektirir, böylece doğal ortamlarında olduğu gibi gelişebilirler. Bu nedenle tam veya defibrilatlanmış kan eklenir. Sıvı, sağlıklı bir hayvandan özümlenir ve bir kez sterilize edildikten sonra kültür ortamına ilave edilir.

alıntılar

Farklı hayvan kısımlarından (et veya karaciğer gibi) veya sebzelerden (tohumlar) elde edilirler ve macun veya toz formunda katı bir konsantre elde etmek için işlenirler. En yaygın maya, malt ve et.

Peptonas

Bu organik bileşikler, hayvansal veya bitkisel dokuların enzimatik veya kimyasal hidrolizi ile elde edilir. Amaç, proteinlerin temel birimleri olan amino asitler açısından zengin içerikler eklemektir.

Şok emiciler

Tamponlar veya tampon sistemleri pH'ta ani değişikliklerden kaçınır ve vücudun tolere ettiği optimum aralığın korunmasına yardımcı olur.

Bazı bakteriler alkalin ortamları tercih etmelerine rağmen, çoğu organizma 7 pH'da düzgün şekilde gelişebilir. Bununla birlikte, 6 ile 9 arasındaki değerler arasında pH değişimlerine direnç gösteren bakteriler vardır.

PH'a duyarlı türlerde hasar, aşırı miktarda hidrojen veya hidroksil iyonları tarafından değil, hücreye nüfuz edebilecek asitlerin veya zayıf bazların artması ile üretilir.

Aynı şekilde, onu izlemek ve fermantasyondan veya diğer işlemlerden kaynaklanan sapmaları önlemek için pH indikatörleri eklenir.

hedefleri

Bir kültür ortamı hazırlarken asıl amaç, izole edilmek isteyen organizmanın başarılı bir şekilde gelişmesini sağlamak için gerekli tüm bileşenleri eklemektir. İstenen besiyerine ulaşmak için bileşenlerin ve besin maddelerinin en etkili kombinasyonu tanımlanmalıdır.

Ortamın hazırlanması ve depolanması, başarılı büyümeyi sağlamak için kritik öneme sahiptir, çünkü bu adımlar ortamın bileşimine ve besinlerin mevcudiyetine bağlıdır.

Mikroorganizmaların ekilmesinin, alınan ışığın şiddeti, sıcaklık ve ortamın asitlik veya alkalinite seviyesi gibi kültür ortamının dışındaki birkaç faktörden etkilenen bir görev olduğu dikkate alınmalıdır. Bu nedenle, bu değişkenlerin her biri dikkate alınmalıdır.

Medya türleri

Bileşimine göre

Bileşimine dayanarak üç ana ürün türü vardır: doğal veya ampirik, yarı sentetik ve tanımlanmış sentetik veya kimyasal araçlar.

Doğal çevre

Doğal ortamlarda kesin kompozisyon bilinmemektedir. Bunlar, süt, seyreltilmiş kan, sebze suları, etler ve peptonların özütleri ve infüzyonları gibi bileşenleri içerir. Ekonomik nedenlerden dolayı, soya özü, peynir altı suyu, melas, vb. Gibi düşük maliyetli bileşenler sıklıkla eklenir.

Yarı sentetik ortam

Kompozisyonu kısmen biliniyorsa, yarı-sentetik besiyeri denir. Agar içeren herhangi bir ortam, yarı sentetik bir ortam haline gelir.

Bunların arasında papa dekstroz ağarı, czapek-doks ağarı, yulaf ağarı, pepton eti ağarı da var.

Sentetik veya kimyasal tanımlı ortam

Bu durumda besiyerinin bileşimi - karbon, azot, kükürt, fosfor ve diğer büyüme faktörü kaynakları bakımından - tam olarak bilinmektedir. Diğer araştırmacılar için tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek istiyorsanız çok yararlıdır.

Sözde "özel büyüme gereksinimli mikroorganizmalar" için gerekli bileşenlerin eklenmesi gerekir. Bu tipin bir örneği Lactobacillus'tur .

Mikroorganizma türüne göre

Benzer şekilde, kültür ortamı için içinde üreyebilecek mikroorganizma türüne dayanan başka bir sınıflandırma daha vardır. Bu prensibi izleyerek, seçici ve diferansiyel olarak aşağıdaki genel zenginleştirme araçlarına sahibiz. Her biri aşağıda açıklanmaktadır:

Genel araçlar

Bunlar çok çeşitli mikroorganizmaların gelişimini kabul etmektedir. Herhangi bir organizmanın büyümesi için özel koşullara ihtiyacı varsa, bu tür bir üründe başarılı bir şekilde gelişemeyecektir.

Zenginleştirme araçları

Zenginleştirme araçları, belirli bir tür mikroorganizmanın büyümesini desteklemektedir, ancak içinde başka mikropların büyümesini engellemek için hiçbir madde eklenmemiştir.

Seçici medya

Bir mikroorganizmanın spesifik büyümesini ararlar, buna mantarlar, bakteriler, protozoa denir, diğerleri arasında. Bunun için başkalarının gelişimini engelliyorlar.

Bu amaca ulaşmak için, büyük bir grup mikroorganizma için ölümcül kimyasal bileşikler eklenebilir ve ilgilenilen organizmaya zararsız veya sadece aranan mikrop tarafından özümlenen enerji kaynakları eklenebilir.

Seçici ortam, patojenik bir mikroorganizmanın büyümesi için tıbbi numuneler alınırken kullanılır. Burada patojenin büyümesini desteklemek ve hastadan normal mikrobiyal floranın gelişimini engellemek gerekir.

Örneğin bizmut sülfit agarı, gram-pozitif bakterilerin ve gastrointestinal oyukta bulunan çok sayıda bakteri üremesine izin vermez. Bu nedenle, dışkı örneklerinde tifo hastalığına, Salmonella typhi'ye neden olan gram negatif bakterilerin yetiştirilmesinde kullanılır.

Diferansiyel ortam

Bu tip, aynı ortamda yetişen başka bir türe karşı onları tanımlayabilmek için ilgilenilen organizmanın (örneğin metabolizmasındaki özellikler) bazı tanısal özelliklerini kullanır.

Hem ayırıcı ortamlar hem de seçici ortamlar, klinik mikrobiyoloji ve halk sağlığı alanında çok faydalıdır, çünkü bu disiplinlerin, zayıf hijyen koşullarına veya koşullarına bağlı spesifik mikroorganizmaların varlığını tespit etmesi gerekir.

İstenilen koloniye belirgin bir özellik kazandıran ekinlere gösterge maddeleri eklenebilir. Örneğin, agar-eozin-metilen mavisi (kısaltılmış EMB) ve MacConkey agarına laktoz ve pH göstergesi eklenir.

Böylece, bu ortamda laktoz fermente edip aldehitler üretme özelliğine sahip bir koloni geliştirildiğinde, bunlar özel bir renkte gözlenebilir.

adımlar

Şu anda kültür ortamı liyofilize formda satın alınabilir. Bu nedenle preparasyon kolaylaştırılır ve sadece ürün rehidre edilir. İçerik tüm ürünün göstergelerinin ardından tartılmalı (hazırlanacak son miktar dikkate alınarak) ve saf su içinde çözülmelidir.

Sıvı ortamın içeriği, sonraki sterilizasyon için istenen kaplara (Petri kapları, tüpler vb.) Bölünmelidir. Katı ortamı dağıtmak için, bir mikrodalga kullanarak veya malzemeyi bir su banyosuna maruz bırakarak eritmek gerekir. Ortamın pH'ı ayarlanmalıdır.

Genellikle agar test tüplerinde veya Petri tabaklarında kullanılır. Agar, eğimli bir konumda, uygun uç ile son terminal kenarı köşegen olacak şekilde katılaşırsa, bu düzenleme oluk tepe noktası veya eğimli borular olarak bilinir. Agar, tamamen dikey bir konumda katılaşınca, "derin" olarak adlandırılır.

Medyayı sterilize ettikten sonra - bir otoklav kullanarak - soğumalarına izin verilir. Bunlar mikroorganizmalardan arındırılmış bir ortamda kullanılmalıdır, en yaygın olanı çevresinde aseptik bir ortam sağlayan aydınlatmalı bir çakmakla çalışmaktır.